Медики часто говорят, что диагностика это половина лечения. И это выражение вполне правдиво, ведь чем раньше будет обнаружен источник заболевания, тем быстрее оно будет вылечено. Скорость обнаружения играет особенно критическую роль в лечение онкологических заболеваний, течение которых может быть стремительным. Ученые из Массачусетского технологического института (Кембридж, США) разработали новую методику ранней диагностики рака легких, которая требует от пациента просто вдохнуть наночастицы, служащие датчиками, а потом сдать анализ мочи. Как именно работает данная диагностика, в чем ее особенности, и насколько она точная? Ответы на эти вопросы мы найдем в докладе ученых.

Основа исследования

Смертность от рака легких продолжает снижаться в странах с высоким индексом развития (HDI от high development index), отчасти благодаря существенному прогрессу в инструментах раннего обнаружения и своевременному терапевтическому вмешательству. Однако непропорционально высокая смертность наблюдается при раке легких в странах с низким и средним уровнем дохода (LMICs от low-and middle-income countries) и коррелирует с выявлением заболевания на поздних стадиях, иллюстрируя неравенство в ранней диагностике в странах с ограниченными ресурсами — одну из главных проблем в борьбе с раком. Там, где это возможно, низкодозная компьютерная томография (LDCT от low-dose computed tomography) была стандартом лечения рака легких на ранних стадиях среди людей с высоким риском и бессимптомным течением, и эта практика привела к снижению смертности в клинических условиях примерно на 20–25%. Тем не менее, ограниченный доступ пациентов к данному методу визуализации и нехватка обученного персонала остаются значимыми преградами визуализации в HDI странах, не говоря уже о LMIC.

Жидкостная биопсия (LB от liquid biopsy), которая выявляет наличие эндогенных, связанных с раком биомаркеров в жидкостях организма, таких как выделяемые белки, циркулирующая опухолевая ДНК (ctDNA от circulating tumor DNA) и опухолевые клетки, становится все более привлекательным неинвазивным инструментом для диагностики и мониторинга рака легких. Эти анализы часто основаны на ресурсоемких аналитических технологиях, таких как хроматография, тандемная масс-спектрометрия, секвенирование и проточная цитометрия, для выявления молекулярных или генетических изменений, присутствующих в отобранных образцах, что ограничивает их применимость в условиях ограниченных ресурсов. Кроме того, обнаружение биомаркеров, связанных с раком, зависит от их попадания в кровоток, что ограничивает использование других признаков заболеваний, основанных на активности.

Например, обнаружено, что протеазы играют прямую функциональную роль во время прогрессирования опухоли и демонстрируют различные признаки экспрессии и активности, но физически расположены в микроокружении опухоли (TME от tumor microenvironment) и, таким образом, могут быть упущены из виду LB.

Авторы рассматриваемого нами сегодня труда разработали экзогенные биомаркеры — диагностику на основе активности (ABD от activity-based diagnostic), которая используют каталитические протеазы для непрерывного высвобождения синтетических штрих-кодов. Эти каталитически амплифицированные и измеримые экзогенные репортеры выявляют признаки протеолитической дисрегуляции в TME, которые связаны с раковыми состояниями с помощью визуализации, биопсии мочи или дыхательной биопсии, тем самым расширяя панель доступных аналитов для более ранней диагностики.

В исследовании ученые описывают модульную платформу для раннего выявления рака легких в формате POC, названную PATROL (point-of-care aerosolizable nanosensors with tumor-responsive oligonucleotide barcodes, т. е. аэрозольные наносенсоры для мест оказания медицинской помощи со штрих-кодами из олигонуклеотидов, чувствительных к опухоли).


Изображение №1

Данная платформа объединяет три модуля — наносенсоры на основе низкоплексной активности (ABN от activity-based nanosensor), портативный ингалятор и мультиплексируемый LFA на бумажной основе. Чтобы обеспечить точную диагностику, ученые объединили транскриптомные данные из человеческих образцов с информацией из более раннего внутритрахеального диагностического исследования на мышах и определили субстраты протеазы, специфичные для аденокарциномы легких I стадии, для исследования протеолитических сигнатур, связанных с опухолью.

Результаты исследования

Поскольку частицы с аэродинамическим диаметром от 1 до 5 мкм имеют тенденцию откладываться в периферических легких человека (2A), ученые сначала попытались преобразовать ABN в аэрозоли субмикронного размера, чтобы их можно было доставлять при вдыхании (2B) через небулайзеры. Ученые начали с синтеза обычного ABN путем функционализации нанокаркаса из полиэтиленгликоля (PEG от polyethylene glycol) с восемью плечами тандемными пептидами, содержащими субстрат матриксной металлопротеиназы (MMP от matrix metalloproteinase) и глю-фибринопептид B репортер, меченный Cy7 (GluFib от glu-fibrinopeptide B). Каждый каркас PEG нес примерно восемь тандемных пептидов, а гидродинамический размер находился в диапазоне от 10 до 15 нм в диаметре.


Изображение №2

Модельные ABN растворяли в 0.9% растворе NaCl в диапазоне концентраций до 2 мМ эквивалента субстрата (или 250 мкМ эквивалента PEG), а затем распыляли с помощью небулайзера с вибрирующей сеткой. Стоит отметить, что производство аэрозоля распылителем значительно снижалось, когда концентрация субстрата превышала 1 мМ (или 0.125 мМ эквивалента PEG), и поэтому ученые приступили к составлению составов ABN, включающих не более 1 мМ субстратов.

Небулайзеры создают аэрозоли непрерывно, тогда как аэрозоли вдыхаются только во время фаз вдоха. Потому необходимо было количественно оценить вдыхаемые пропорции аэрозолей ABN, определяемые как доставленные дозы. Для измерения доставленных доз in vitro использовался упрощенный имитатор дыхания для создания репрезентативных профилей (т. е. синусоидальных) дыхания человека, а аэрозоли собирались во время циклов вдоха в импакторе нового поколения (NGI от next-generation impactor) (2B) — упрощенная модель трахеобронхиального дерева и альвеол человека.

Доставленные дозы аэрозолей, образующиеся при различных концентрациях ABN, оставались практически неизменными и составляли от 35 до 38% (2C), а остаточный объем конденсированных аэрозолей в распылителе и Т-трубках был одинаковым и минимальным. NGI собирает пробы аэрозолей поэтапно по мере их прохождения через каскад сопел все более мелкого размера (2B, 2D), а массу аэрозолей, осажденных на каждом этапе, можно использовать для оценки аэродинамического размера и дозы мелких частиц (2D). Средний массовый аэродинамический диаметр (MMAD от median mass aerodynamic diameter) аэрозолей ABN, генерируемых небулайзером с вибрирующей сеткой, составлял от 3.72 до 4.35 мкм (2D, 2E), а изменение размера было обратно пропорционально концентрации ABN. И наоборот, фракции мелких частиц (FPF от fine particle fraction) этих аэрозолей, параметр, который оценивает фракции аэрозоля, способствующие отложению на периферии легких, были пропорциональны концентрациям ABN, достигая пика при 60.2% доставленной дозы (2F). Как доставляемые дозы, так и FPF попадают в диапазон ингаляционных препаратов, тестируемых с помощью одного и того же небулайзера. Размер и протеолитическая чувствительность ABN до и после распыления практически не изменились по сравнению с исходными показателями (2G).

Чтобы обеспечить доставку высоких доз в глубокие легкие и повысить экономическую эффективность и простоту использования ингаляционных устройств для POC обнаружения, нужно было также изучить возможность создания наносенсоров в портативных, не требующих электроэнергии и устройствах — DPI, которые способны доставлять большие дозы субмикронных порошков (сухих аэрозолей) в легкие в течение нескольких секунд при однократном вдохе.

Ученые использовали технологию инженерии частиц, называемую усиленным ростом наполнителя, для создания сухих частиц микрометрового размера (от 1 до 3 мкм), не содержащих носителя, которые увеличиваются в размерах после вдыхания, чтобы минимизировать осаждение в верхних дыхательных путях и максимизировать целевое осаждение на периферии легких.

Раствор наносенсорных коктейлей, маннита (гигроскопического наполнителя) и l-лейцина (поверхностно-активного усилителя дисперсии) распыляли совместно через распылительную сушилку, где раствор нагревается на входе и распыляется с последующим выходом в виде субмикронных порошков. Полученные микрочастицы имеют относительно грубую морфологию поверхности (2H). Эти сухие частицы могут высвобождать наносенсоры сразу после растворения в искусственной легочной жидкости, что указывает на возможность быстрого растворения вдыхаемых микрочастиц при контакте с влажными дыхательными путями.

Затем эти микрочастицы были помещены в капсулу, которую вставляли в клинически используемый ингалятор (RS01). Короткий период потока воздуха (приблизительно 3–4 с и в зависимости от сопротивления ингалятора), имитирующий глубокий вдох, приводит к дезагрегации и попаданию микрочастиц в NGI для оценки аэродинамических характеристик.

Распылительная сушка при температуре на входе = 60°C дает наибольшую выделяемую дозу (92.3 ± 3.0% от общей массы микрочастиц, загруженных в капсулу; 2I) и FPF (91% ± 1.3% от выделяемой дозы; 2J) и наименьший средний массовый аэродинамический диаметр (2.1 ± 0.1 мкм; 2K). Это говорит о том, что почти все микрочастицы не только пригодны для вдыхания, но и потенциально могут достигать глубоких слоев легких (т.е. областей, богатых бронхиолами и альвеолами).

Несмотря на то, что выделяемые дозы и FPF незначительно уменьшаются по мере сопротивления ингалятора (2L), все ингаляторы могут выбрасывать более 80% микрочастиц (выделяемая доза) и генерировать от 78 до 91% мелких частиц (от выделенной дозы), способствующих отложению на периферии легких.


Изображение №3

На сегодняшний день гетерогенные злокачественные новообразования обычно классифицируются с помощью высокопроизводительного скрининга больших панелей биомаркеров, однако этот процесс требует ресурсоемких методов. Ученые стремились определить минимальный набор прецизионных датчиков, которые могли бы обеспечить высокую прогностическую способность посредством простых операций скрининга, подходящих для децентрализованных условий, и тем самым помочь в раннем обнаружении.

Используя опухолевые протеазы, ученые создали библиотеку ABN, которая может обнаруживать рак легких на ранних стадиях, основываясь на ранее проверенных зондах и назначая дополнительные протеазы и субстраты, специфичные для ранних поражений. Ученые использовали DESeq2 для идентификации дифференциально экспрессируемых протеаз в опухолевых и неопухолевых тканях у пациентов с аденокарциномой легкого I стадии в базе данных Атласа генома рака (TCGA от The Cancer Genome Atlas).

Было обнаружено значительное нарушение регуляции протеаз даже на самых ранних стадиях заболевания. Затем была создана библиотека из 73 пептидных субстратов, взятых из литературы, которые были объедены с флуоресцентными метками, чтобы сформировать активируемые зонды для скрининга in vitro против выбранных, дисрегулируемых протеаз. Зонды инкубировали с рекомбинантными протеазами, а также измеряли кинетику расщепления, отражаемую кратными изменениями сигналов флуоресценции. Среди 73 номинированных субстратов были выбраны 15 субстратов по их селективности и чувствительности к целевым протеазам (3A, 3B). Далее ученые выбрали еще 5 пептидных последовательностей из существующей библиотеки субстратов, чтобы расширить возможности исследования активности металлопротеаз и протеаз, секретируемых путем проникновения иммунных клеток. По данным скрининга in vitro, субстраты демонстрируют высокую специфичность в отношении семейства протеаз и преимущественную селективность в отношении протеаз того же подтипа (3B).

Окончательная расширенная группа из 20 кандидатов была затем оценена с помощью скрининга in vivo на моделях мышей, чтобы выбрать небольшой индивидуальный набор зондов с совместимостью с низким уровнем плекса (3A).

В частности, набор 20-плексных ABN был синтезирован путем конъюгации тандемных пептидов с массовым кодированием (изотоп GluFib + субстратный пептид) с нанокаркасами PEG. Затем проводилась оценка ABN на мышах с аутохтонной аденокарциномы легкого, индуцированной KrasLSL-G12D;Trp53fl/fl (KP). Предыдущая работа установила, что эта модель точно воспроизводит прогрессирование заболевания человека от альвеолярной аденоматозной гиперплазии до аденокарциномы IV степени.

Опухолям легких давали возможность расти в течение 7.5 недель (KP7.5), после чего узелки в легких были гистологически отнесены к I/II степени, а размеры узлов обычно были менее 0,5 мм в диаметре (3D). Объединенные 20 ABN вводили мышам интратрахеально, а моча выделялась через 60-120 минут после введения ABN. Репортеры с масс-кодированием, присутствующие в образцах мочи, были проанализированы с использованием жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии (LC-MS/MS от liquid chromatography–tandem mass spectrometry).

Как показано на графике 3E, 9 из 20 зондов обладают значительной способностью обнаружения. Неконтролируемое уменьшение размерности с помощью анализа главных компонентов (PCA от principal components analysis), алгоритма, который преобразует большой набор переменных в меньший без потери какой-либо важной информации, также показало, что этот 20-плексный ABN способен на раннем этапе идентифицировать мышей с опухолями (3F).

Используя анализ переменной важности с помощью модели случайного леса, мы дополнительно определили 5 лучших зондов (PLQ38 > PLQ46 > PLQ83 > PLQ7 0 > PLQ81) среди тех, у которых наблюдалось наибольшее кратное изменение и значимость результатов (3E, 3G). Были выбраны выбрали PLQ38, PLQ46, PLQ83 и PLQ81 как несмещенная 4-плексная панель. Примечательно, что ученые исключили PLQ70, хотя в списке важности он занимает более высокое место, чем PLQ81. Такой выбор был сделан потому, что PLQ38, PLQ46 и PLQ83 также чувствительны к сериновым протеазам (например, PRSS, HGFAC или F2), которые расщепляют PLQ70, тогда как PLQ81 является субстратом металлопротеазы. Таким образом, ученые выбрали эту подгруппу из четырех ABN, чтобы преобразовать ее в низкоплексную ингаляционную панель и оценить ее диагностическую эффективность in vivo для выявления аденокарциномы легких на ранней стадии.


Изображение №4

Затем ученые приступили к проверке ингаляционных составов ABN in vivo для выявления рака легких. Хотя микрочастицы на основе DPI демонстрируют превосходный потенциал для глубокого осаждения в легких у людей, небулайзеры остаются основным кандидатом для проверки in vivo, учитывая отсутствие DPI, предназначенных для грызунов (DPI активируются при дыхании), и, следовательно, преимущество DPI в отношении осаждения в легких невозможно воспроизвести на грызунов. Подопытных мышей фиксировали и распыляли нанодатчики через носовые отверстия.

Стоит отметить, что распыленные ABN приводили к более равномерному распределению по периферии легких, в то время как интратрахеально введенные ABN имели тенденцию накапливаться в бронхах и центральных легких с высокой вариабельностью среди мышей в тестируемой когорте (4A). Такая высокая гетерогенность распределения может концентрироваться на определенных респираторных зонах, пропуская другие, тем самым ухудшая обнаружение опухолевых узлов. Также было установлено, что концентрация высвобожденных репортеров в плазме и моче была выше в группе небулайзера, чем в группе внутритрахеального введения при одинаковом количестве ABN. В отличие от интратрахеальной инстилляции, ингаляционные ABN, которые откладываются в верхних дыхательных путях, выводятся в желудочно-кишечную систему за счет захвата слизи и мукоцилиарного эскалационного клиренса.

Чтобы оценить, попадают ли эти ABN обратно в системный кровоток, ученые перорально вводили ABN мышам через зонд и исследовали фармакокинетику, биораспределение и показатели мочи. Было установлено, что никакие флуоресцентные сигналы ни от расщепленных репортеров, ни от интактных ABN не были обнаружены за пределами органов пищеварения. Это позволяет предположить, что проглоченные наносенсоры не будут давать фоновые сигналы в моче, которые снижают диагностическую эффективность. ABN в желудке и кишечнике выводились в течение 24 часов.

Затем ученые исследовали, могут ли небулайзерные 4-плексные наносенсоры обнаруживать аденокарциному легкого на ранних стадиях и могут ли они использоваться в качестве альтернативы внутритрахеальной инстилляции. Масс-кодированные 4-плексные ABN вводили через распылитель KP7.5wk (рост опухолей в течение 7.5 недель) и здоровым мышам (4B).

Мочевые сигналы всех четырех репортеров значительно различались при введении через небулайзер, что указывает на значительные изменения сигнатуры протеолитического расщепления между KP7.5wk и здоровыми мышами (4C).

Сравнение диагностической способности одних и тех же сенсоров, вводимых двумя разными путями, показало, что неконтролируемое уменьшение размерности с помощью PCA позволило классифицировать большинство KP7.5wk мышей от здоровых аналогов в группе интратрахеальной инстилляции и всех KP7.5wk мышей в группе небулайзера (4D).

ROC-анализ показал, что распыленные наносенсоры статистически эквивалентны интратрахеальному методу ввода (4E). При 100% специфичности небулайзерные 4-плексные ABN продемонстрировали чувствительность 84.6%, что немного превышает 75.5% в группе интратрахеальной инстилляции, но без статистических различий. Таким образом, вдыхаемое низкоуровневое мультиплексирование рационально выбранных ABN демонстрирует надежную эффективность для раннего обнаружения автохтонной аденокарциномы легких у мышей.


Изображение №5

Ученые отмечают, что среди целей исследования одной из важнейших была разработка POC анализа для количественной оценки подписи ssDNA (оцДНК от одноцепочичная ДНК) мочи с простотой мультиплексирования, возможностью работы при комнатной температуре, а также высокой чувствительностью и селективностью. На 5A описана конструкция мультиплексируемого LFA, который работает на основе гибридизации ДНК на одной полоске.

Целевые штрих-коды имеют длину 20 нуклеотидов на фосфортиоатном остове с биотином на 5'-концах. На LFA штрих-коды оцДНК мочи сначала помечаются меченным европием (Eu) нейтравидином, который предварительно загружен на площадку для конъюгата. Eu используется в качестве флуоресцентного индикатора для количественных измерений.

Затем рабочий буфер переносит штрих-коды ДНК, меченные Eu, по тест-полоске, где штрих-коды ДНК впоследствии гибридизуются с последовательностями захвата, образуя таким образом флуоресцирующие тестовые полоски. Каждый тест занимает около 20 минут при комнатной температуре, а затем тест-полоски можно проанализировать с помощью коммерческого флуоресцентного POC анализатора.

На 5B показана относительная интенсивность флуоресцентных сигналов на нитроцеллюлозной мембране, где происходили события гибридизации с зондом захвата, после нанесения различных концентраций соответствующего штрих-кода ДНК. Примечательно, что анализ был достаточно чувствительным для количественного определения субнаномолярных концентраций мишени. Ученые заблокировали Eu-нейтравидин казеином и дополнительно отрегулировали pH рабочего буфера для улучшения качества сигнала.

Возможность мультиплексирования анализа была достигнута за счет пространственной печати отдельных линий ДНК на расстоянии 4 мм друг от друга. Ученые изменили размеры LFA, чтобы он был совместим с коммерчески доступным флуоресцентным POC считывателем, и сравнили производительность считывателя с производительностью настольной модели в интересующих диапазонах концентраций.

Был проведен анализ обнаружения различных концентраций четырех отдельных предварительно созданных штрих-кодов оцДНК (т.е. DNA1, DNA2, DNA3, DNA4) при нанесении на 4-плексные полоски. Было установлено, что мультиплексированный LFA имеет рабочий линейный диапазон от 0 до 100 нМ DNA1, DNA2, DNA3 и DNA4 (5C). Отмечается, что чувствительность анализа для каждого штрих-кода варьируется в пределах линейного диапазона, что может быть связано с эффективностью гибридизации ДНК-мишеней с их соответствующими захватами и количеством зондов захвата на каждой тестовой линии.

Далее была проверена селективность LFA анализа с помощью растворов, содержащих 100 нМ каждого отдельного штрих-кода ДНК. В ходе опыта оценивалась относительная флуоресценция с использованием флуоресцентного POC считывателя между каждым тестом. Как показано на 5D, анализ продемонстрировал высокую селективность штрих-кодов целевой ДНК. На 5E показаны репрезентативные изображения LFA при тестировании на образцах мочи, в которые добавлены отдельные или объединенные штрих-коды ДНК, полученные с помощью смартфона под УФ-лампой.

Таким образом, данные опыты показали, что настроенный LFA способен одновременно фиксировать различные количества мультиплексированных штрих-кодов ДНК в моче с высокой чувствительностью и специфичностью.


Изображение №6

После проверки отдельных частей ученые попытались интегрировать три модуля в единую диагностическую платформу — PATROL (изображение №1 и 6A). ДНК-кодированные ABN были синтезированы путем присоединения биотинилированных штрих-кодов ДНК к PEG каркасам через пептидные субстраты (т.е. PLQ38-DNA1, PLQ46-DNA2, PLQ81-DNA3 и PLQ83-DNA4). ABN имели диаметр примерно 15 нм и были сильно отрицательно заряжены. Каждый PEG нанокаркас был ковалентно связан примерно с четырьмя тандемными штрих-кодами пептид-ДНК.

Затем ученые, используя тех же KP7.5wk, попытались проверить обнаружение репортера ДНК в моче через LFA после введения ABN, доставленных с помощью небулайзера (6B). На 6C показаны репрезентативные фотографии LFA для здоровой (синий, вверху) или KP (красный, внизу) мыши, а также количественная оценка сигналов флуоресценции (измеряется как площадь под кривой каждого пика) для каждого штрих-кода ДНК.

Далее проводилось сравнение концентрации каждого штрих-кода в моче между двумя группами мышей и построение графика соотношений показателей мочи больных мышей относительно здоровых (6D). Между здоровыми и больными мышами наблюдалось значительное отличие в PLQ38, PLQ46 и PLQ83, но не в PLQ81. Примечательно, что показатели мочи, полученные с помощью LC-MS/MS и LFA, не показали существенной разницы в соотношении сигнал/шум (6E). Неконтролируемая кластеризация позволила классифицировать всех KP7.5wk мышей с аденокарциномой легких I/II степени (6F). PLQ38, PLQ46 и PLQ83 продемонстрировали компетентную прогностическую способность как единый классификатор на основе расчетных значений AUC 0.82, 0.88 и 0.85 соответственно (6G). Общая точность обнаружения четырех зондов увеличилась до 0.93 (6H).


Изображение №7

В качестве дополнительного доклинического этапа ученые исследовали профиль безопасности высокой дозы ингаляционных ABN со штрих-кодами ДНК (в три раза более высокие дозы, чем протестированные выше). Ни общей токсичности, ни закупорки сосудов не наблюдалось в основных органах мышей дикого типа через 7 дней после однократной дозы ABN (7A).

Далее ученые оценили секрецию интерферона-γ (IFN-γ), основного воспалительного цитокина, продуцируемого активированными иммунными клетками, и рассмотрели показатель иммуногенности введенного вещества. Через 7, 14 и 30 дней после введения ABN мононуклеарные клетки периферической крови были отделены для иммуноферментного анализ (ELISPOT). При стимуляции той же панелью ABN ученые обнаружили, что IFN-γ не секретировался циркулирующими лимфоцитами в любые тестируемые моменты времени. Это значит, что вдыхаемых ABN (т.е. пептидные субстраты, PEG каркасы и ДНК штрих-коды) был неиммуногенным (7B и 7C).

Для более детального ознакомления с нюансами исследования рекомендую заглянуть в доклад ученых и дополнительные материалы к нему.

Эпилог

В рассмотренном нами сегодня труде ученые создали систему быстрой, легкой и дешевой диагностики рака легких на ранних этапах его развития. Опыты показали, что степень определения рака первой и второй категории у мышей составляет 93%. Но самое удивительное даже не отличные результаты обнаружения, а форма данной диагностической процедуры.

Обычно рак легких обнаруживается с помощью МРТ сканирования или других сложных и дорогих тестов, которые далеко не всегда могут показать признаки болезни в ее ранних стадиях. Метод, созданный учеными, заключается в том, что пациент должен просто вдохнуть через небулайзер аэрозольный раствор и после сдать анализ мочи.

Данный аэрозоль содержит наносенсоры, которые проникают в самые отдаленные участки легких и реагируют на определенные элементы, которые являются признаками наличия раковых клеток. После этого, наночастицы попадают в кровоток и выводятся из организма с мочой. Анализируя определенные штрих-коды ДНК внутри мочи, ученые могли определить есть ли у мыши рак или нет.

По словам ученых, их метод не только весьма точный, но и намного дешевле и доступнее, чем классические методы диагностики. Доступность данного метода позволит бороться с раком легких даже в странах, где ранее это было невозможно из-за отсутствия своевременного обнаружения недуга.

Немного рекламы

Спасибо, что остаётесь с нами. Вам нравятся наши статьи? Хотите видеть больше интересных материалов? Поддержите нас, оформив заказ или порекомендовав знакомым, облачные VPS для разработчиков от $4.99, уникальный аналог entry-level серверов, который был придуман нами для Вас: Вся правда о VPS (KVM) E5-2697 v3 (6 Cores) 10GB DDR4 480GB SSD 1Gbps от $19 или как правильно делить сервер? (доступны варианты с RAID1 и RAID10, до 24 ядер и до 40GB DDR4).

Dell R730xd в 2 раза дешевле в дата-центре Maincubes Tier IV в Амстердаме? Только у нас 2 х Intel TetraDeca-Core Xeon 2x E5-2697v3 2.6GHz 14C 64GB DDR4 4x960GB SSD 1Gbps 100 ТВ от $199 в Нидерландах! Dell R420 — 2x E5-2430 2.2Ghz 6C 128GB DDR3 2x960GB SSD 1Gbps 100TB — от $99! Читайте о том Как построить инфраструктуру корп. класса c применением серверов Dell R730xd Е5-2650 v4 стоимостью 9000 евро за копейки?